重组肠激酶

重组肠激酶
CAS:9014-74-8
来源：大肠杆菌表达
 产 品 简 介
       重组肠激酶是一种高纯度的重组牛肠激酶轻链片段。该酶经纯化，纯度高，特异性高，不含其他蛋白酶。肠激酶可以切 割含有四个天冬氨酸的赖氨酸羧基端肽键：天冬氨酸-天冬氨酸-天冬氨酸-天冬氨酸-赖氨酸 (DDDDK).    可以在较 宽 pH 范围(4.5-9.5)和较宽温度范围内有效切割融合蛋白。肠激酶可去除位于蛋白质N- 末端的融合蛋白，以除去不 需要的融合标签。
 应 用 范 围
      肠激酶具有高度专一性，水解效率高的特点，它被广泛地应用于基因工程产品的开发，其应用之一是作为工具蛋白酶用 于重组融合蛋白质的特异性断裂，尤其适用于生物工程制药业及基因工程、生物化学、分子生物学等研究。本重组表达 产品携带his 标签，便于切割目标蛋白后除去，保证酶切的可控性和特异性。本产品为采用重组大肠表达的高纯度、高 活性的重组牛源肠激酶，适用范围广(4-45℃, pH4.5-9.5),  并且在各种去垢剂和变性剂存在的条件下仍具有部分活 性重组抗体的质量检测；蛋白质C-末端氨基酸的测定；其它重组多肽类物质的生产。
 产 品 优 势
       本公司生产的肠激酶，其序列与动物肠激酶相同，可以替代动物源性肠激酶用于各个领域；酶纯度高，活性高，无外源 蛋白和动物源性蛋白污染；产品以干粉形式存在，便于运输和保存。
 产品特性

产品来源	大肠杆菌表达
产品外观	白色、灰白色粉末
酶活测定	≥5.0 U/μl
纯度(SDS-PAGE)	>90%
分子量(蛋白电泳)	25.8 ±2.6kDa

酶活定义：1U定义为在25℃,12h-16h之内，将0.5mg保存于25mM Tris-HCI 8.0缓冲液中的融合蛋白切割95%
所需的酶量。
产 品 使 用 建 议
5.125℃酶切条件：
按照酶活性定义，酶切条件举例：25mM Tris-HCI 8.0体系中：融合蛋白0.1-1mg/ml  (蛋白总量50-100μg) 重组EK0.1-0.2U25℃ 过夜酶切，或完全酶切需16-24h, 用SDS-PAGE 检测酶切效果。
5.24℃低温酶切条件：4℃能对底物进行有效酶切，但需要将酶切时间延长至48-64h, 或增加2-3倍酶量。
5.3酶切优化和放大优化：可以对酶切条件进行优化，例如缓冲液pH, 融合蛋白浓度，EK 的量，以及酶切时间，使融合蛋白能在稳定条件下被酶切，用SDS-PAGE  检测酶切效果。
5.4去除重组肠激酶的方法：使用胰蛋白酶抑制剂亲和层析(例如sigma     T0637) 去除重组肠激酶。
5.5注意：不建议37℃条件下酶切，可能会有非特异性酶切出现。
 储 存 和 运 输 稳 定 性
酶液储存稳定性： -20℃,24个月稳定；25℃,一周内，无活性损失，
缓冲体系：50mM     Tris-HCI,pH8.0,0.25M     NaCI,50%甘油。
酶液反复冻融稳定性：反复冻融5次，无活性损失。
运输稳定性：蓝冰保温运输，稳定。
 注 意 事 项
在>200mM 咪唑，或>200mMNaCI,  或>5%甘油，酶切效果受影响。可参照以下推荐方法进行酶切：
7.1为获得理想酶切结果，请将样品透析到25mM Tris-HCI 8.0缓冲液中，再进行酶切.
7.2若不便透析，可将样品稀释，咪唑含量在100mM 以下，NaCl浓度在50mM 以下，甘 油浓度小于5%以下进行酶切，酶的用量与蛋白的比例不变(即1U 酶切500μg蛋白)。
7.3如果样品溶液中含有上述成分中的一种或多种，且不便去除，此时适当 增加酶量或延长酶切时间，也可达到较好酶切效果。